在實驗中使用生物緩沖劑的要求有哪些?
緩沖溶液作為重要的實驗溶液,經(jīng)常會在各大生物實驗操作中出現(xiàn),其主要作用就是對反應(yīng)體系的PH值有平衡作用,作為受青睞的溶液之一,在實驗中選擇使用時也有很多條件限制。所以接下來,就具體給大家談一談實驗中使用緩沖液的選擇要求。
一、生物緩沖劑pH值的選擇
實驗中的緩沖范圍必須要符合反應(yīng)體系的pH值才能保證實驗結(jié)果的準確性以及避免操作過程中出現(xiàn)干擾性,緩沖范圍的pH值通常取決于電離解數(shù)pKa值,但是pKa值又和鹽或酸濃度有關(guān),所以常根據(jù)公式來進行計算。理論上緩沖范圍PH值在9.4-11.7之間,但在實際的實驗中為了保證準確度,通常會采用pH值在9.7-11.7之間的緩沖液,例如:CAPS緩沖液。有時可能也會根據(jù)實驗?zāi)康?,使用其它范圍的pH值,但都需要進行選擇,不能完全使用同一種范圍的pH。
二、電離平衡常數(shù)及緩沖范圍要求
有很多測定實驗中會要求反應(yīng)溶液的PH值穩(wěn)定在一定的范圍內(nèi),以保證實驗進程不發(fā)生變化,通過加入一定量的緩沖液,達到中和,使得緩沖范圍控制在所需要的范圍內(nèi)。另外,有時在采用電位滴定法測定時,需要不同配比且是同一種緩沖液的滴定曲線,這時對于電離平衡常數(shù)也有要求,需要特別注意。
三、生物緩沖劑的使用限制條件
通常情況下,緩沖范圍合理,符合反應(yīng)體系,就需考慮反應(yīng)體系的限制性條件,例如:PBS緩沖液會絡(luò)合金屬離子鈣,酶等,而有些反應(yīng)體系中酶或蛋白質(zhì)活性卻受到金屬離子的影響,這時就不能使用此種緩沖液。另外,還有一些其它類型的緩沖液也是需要根據(jù)實驗測定目的來使用,并非使用一種緩沖液適用于所有的生物實驗。
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